细胞中的RNA可分为信使RNA、转运RNA和核糖体RNA三大类,不同组织总RNA提取实质就是将细胞裂解,释放出RNA,并通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质,最终获得高纯RNA产物的过程。再在逆转录酶的催化下,随机引物、oligo(dT)或基因特异性引物的引导下合成互补的DNA (complementary DNA,cDNA)。
取材-RNA提取-测浓度-逆转录成cDNA
细胞RNA提取凝胶电泳图
1.动物组织:100mg(黄豆大小),最少50mg(绿豆大小),脂肪组织,结缔组织,纤维化组织适当增加,干冰运输。
2.细胞:1×106个细胞。细胞沉淀或加入Trizol的细胞样本(不要直接运输加trizol的细胞培养皿),干冰运输。
3.全血:最少1mL新鲜血液EDTA抗凝管,4度运输。
4.血清:最少1mL,干冰运输。
5.植物:新鲜的叶、果肉、种子等需100mg,干冰运输。
6.细菌:约30μL单菌沉淀,干冰运输。