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Elisa(酶联免疫吸附剂测定)

技术介绍


ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体(聚苯乙烯)微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。

              



 实验流程


双抗体夹心法实验流程:

竞争法实验流程:




实验步骤


实验流程(以实际试剂盒品牌说明书为准):

1.样本准备:血清、血浆、组织匀浆、细胞上清;

2.操作步骤:处理样本配制标准品—加样(标准品及样本)—洗板,加检测抗体溶液,孵育—洗板,加酶溶液,孵育— 洗板,加TMB底物— 加终止液50ul,立即450nm读数(双抗夹心法)。

处理样本配制标准品—加样(标准品及样本)—加酶溶液—加检测抗体— 混匀孵育— 洗板,加TMB显色— 加终止液50ul,立即450nm读数(竞争法)


案例结果展示


样本OD值代入标曲中计算出浓度,结果以EXCEL形式发出

           

  


 


注意事项


1.  在使用试剂盒时,从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,平衡至室温使结晶完全溶解再配制洗涤液;

2.  充分混匀对反应结果尤为重要,***使用微量振荡器;

3.  标准品分装后根据试剂盒说明书的要求,保存于4℃~-20℃,避免反复冻融。

 


ELISA(酶联免疫吸附剂测定)
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