如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色，则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染，肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染，而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小，肌纤维与胞质次之，而胶原纤维具有***的渗透性。根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。

实验流程

脱蜡至水—ZGSJ过夜-铁苏木素染色-丽春红酸性品红-磷钼酸染色-苯胺蓝染色—脱水封片—显微镜镜检

实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自来水洗。

2、切片浸入Masson A液中浸泡过夜，自来水洗。

3、切片入Masson B液及Masson C液等比混合的染液，浸染1min，自来水洗，1%盐酸酒精分化，自来水洗。

4、切片入Masson D液浸染6 min，自来水漂洗。

5、Masson E液浸染1 min。

6、不水洗，稍沥干直接入Masson F液染2-30s。

7、切片用1%冰醋酸漂洗分化，两缸无水乙醇脱水。

8、透明封片：切片放入第三缸无水乙醇5min，二甲苯5min透明，中性树胶封片。

9、显微镜镜检，图像采集分析。

案例-实验结果展示

结果判读

胶原纤维呈天蓝色至亮深蓝色;肌纤维、胞质、纤维素、角质白呈红色至紫红色;红细胞呈水红色。

送样运输要求

1.样本放置于＞10倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。

2.石蜡切片常温运输，冰冻切片-20℃运输。

样品类型	样品需求	保存条件	运输条件	备注
新鲜组织	新鲜取材组织，用 PBS 清洗干净血液等，立即-80℃保存	-80℃	干冰	所有样本均须有***标记，且标记清晰可识
一般固定组织	一般组织体积不超过2cmX2cmX0.5cm，固定时尽量保持组织的原有形态并清理干净血液及多余部分，如肠道内容物；固定液体积为组织大小的10倍以上，容器足够容纳组织不使其挤压变形。标注好固定液类型和固定时长	常温	常温
特殊固定组织	睾丸、眼球、脊髓、肌肉等组织：推荐使用对应的特殊固定液进行固定，以保证固定效果。如Bouin液，适用于睾丸组织、皮肤组织及眼球的固定
组织蜡块	组织由标准的石蜡包埋盒包埋（尺寸为30247mm），石蜡与组织要均匀接合，不能有裂痕；蜡块厚度根据所需切片的数量而定，有效厚度至少要超过 0.1cm。尽量提供半年内的组织蜡块，超过半年的蜡块抗原可能丢失，做免疫组化可能出现检测不到蛋白。	常温	常温
组织切片	需用防脱载玻片进行捞片，并注明切片厚度、已烤片温度与时间，组织应在靠近切片下端 1/3 处。	4℃	冰袋
细胞爬片	使用 12 孔板或 24 孔板专用细胞爬片，细胞爬片经固定后用 PBS 洗涤 2~3 次，保存在 PBS 中，用封口膜密封孔板。每个爬片在孔板盖上应有***的标记，并有电子版的分组信息，以防标记在运输途中模糊。	常温	常温
植物样本	新鲜组织FAA固定，木质化程度不高；对于较薄的叶片，如果要求平行叶片切片，难以保证切完整；根茎要求直径>1mm	常温	常温
抗体	保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记，并附带说明书，抗体的量应大于实验所需的量。组织切片、组织芯片按稀释后 100μl 一张切片计算抗体用量， 24 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 200μl 一张计算抗体用量，12 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 400μl 一张计算抗体用量。	-20℃	冰袋或干冰

注意事项

1、Masson A液染完后水洗要稍快，切片洗干净即可。

2、根据切片的数量对混合的染液进行更换，也可以现配现用；

3、Masson D液的染色程度要控制好，胶原部分不能是红色或者太红，会影响后续Masson F液的着色；

4、冰醋酸分化过程中，若是分化过度，胶原蓝色太浅，若分化不足，易与红色叠加呈紫蓝色。

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