Masson染色:丽春红酸性品红-苯胺蓝染色,是用于检测动物组织中胶原纤维的一种染色方法之一,能够将胶原纤维染成蓝色,肌纤维、和红细胞呈红色,可用于鉴胶原纤维和肌纤维;并显示各种组织胶原纤维含量及纤维化程度。
如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染,肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有***的渗透性。根据组织不同的渗透性能,选择分子大小不同的阴离子染料进行染色,便可把不同组织成分显示出来。
脱蜡至水—ZGSJ过夜-铁苏木素染色-丽春红酸性品红-磷钼酸染色-苯胺蓝染色—脱水封片—显微镜镜检
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。
2、切片浸入Masson A液中浸泡过夜,自来水洗。
3、切片入Masson B液及Masson C液等比混合的染液,浸染1min,自来水洗,1%盐酸酒精分化,自来水洗。
4、切片入Masson D液浸染6 min,自来水漂洗。
5、Masson E液浸染1 min。
6、不水洗,稍沥干直接入Masson F液染2-30s。
7、切片用1%冰醋酸漂洗分化,两缸无水乙醇脱水。
8、透明封片:切片放入第三缸无水乙醇5min,二甲苯5min透明,中性树胶封片。
9、显微镜镜检,图像采集分析。
胶原纤维呈天蓝色至亮深蓝色;肌纤维、胞质、纤维素、角质白呈红色至紫红色;红细胞呈水红色。
1.样本放置于>10倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。
2.石蜡切片常温运输,冰冻切片-20℃运输。
样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
新鲜组织 | 新鲜取材组织,用 PBS 清洗干净血液等,立即-80℃保存 | -80℃ | 干冰 | 所有样本均须有***标记,且标记清晰可识 |
一般固定组织 | 一般组织体积不超过2cmX2cmX0.5cm,固定时尽量保持组织的原有形态并清理干净血液及多余部分,如肠道内容物;固定液体积为组织大小的10倍以上,容器足够容纳组织不使其挤压变形。标注好固定液类型和固定时长 | 常温 | 常温 | |
特殊固定组织 | 睾丸、眼球、脊髓、肌肉等组织:推荐使用对应的特殊固定液进行固定,以保证固定效果。如Bouin液,适用于睾丸组织、皮肤组织及眼球的固定 | |||
组织蜡块 | 组织由标准的石蜡包埋盒包埋(尺寸为30*24*7mm),石蜡与组织要均匀接合,不能有裂痕;蜡块厚度根据所需切片的数量而定,有效厚度至少要超过 0.1cm。尽量提供半年内的组织蜡块,超过半年的蜡块抗原可能丢失,做免疫组化可能出现检测不到蛋白。 | 常温 | 常温 | |
组织切片 | 需用防脱载玻片进行捞片,并注明切片厚度、已烤片温度与时间,组织应在靠近切片下端 1/3 处。 | 4℃ | 冰袋 | |
细胞爬片 | 使用 12 孔板或 24 孔板专用细胞爬片,细胞爬片经固定后用 PBS 洗涤 2~3 次,保存在 PBS 中,用封口膜密封孔板。每个爬片在孔板盖上应有***的标记,并有电子版的分组信息,以防标记在运输途中模糊。 | 常温 | 常温 | |
植物样本 | 新鲜组织FAA固定,木质化程度不高;对于较薄的叶片,如果要求平行叶片切片,难以保证切完整;根茎要求直径>1mm | 常温 | 常温 | |
抗体 | 保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,并附带说明书,抗体的量应大于实验所需的量。组织切片、组织芯片按稀释后 100μl 一张切片计算抗体用量, 24 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 200μl 一张计算抗体用量,12 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 400μl 一张计算抗体用量。 | -20℃ | 冰袋或干冰 |
注意事项
1、Masson A液染完后水洗要稍快,切片洗干净即可。
2、根据切片的数量对混合的染液进行更换,也可以现配现用;
3、Masson D液的染色程度要控制好,胶原部分不能是红色或者太红,会影响后续Masson F液的着色;
4、冰醋酸分化过程中,若是分化过度,胶原蓝色太浅,若分化不足,易与红色叠加呈紫蓝色。