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天狼猩红染色

技术介绍


天狼猩红(Picrosirius Red )染色可用于区分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型胶原,由于天狼猩红是一种强酸性阴离子染料,可与呈碱性的胶原反应,使胶原纤维在偏振光照射时,产生明显的双折光现象。不同的胶原纤维具有不同的旋光性,在偏振光显微镜下呈现相异的颜色,借以区分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型胶原,Ⅰ型纤维:紧密排列, 显示很强的双折光性,呈黄色或红色的纤维;Ⅱ型纤维:显示弱的双折光,呈多种色彩的疏松网状分布;Ⅲ型纤维:显示弱的双折光,呈绿色的细纤维;Ⅳ型纤维:显示弱的双折光的基膜,呈淡黄色。

 天狼猩红染色可直接观察分析胶原纤维化程度,主要应用于各种组织病变时对胶原纤维异常或纤维增生的研究。


实验流程


脱蜡至水-天狼猩红染色-酒精脱水-封片。


实验步骤


1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。

2、天狼猩红染色:切片入天狼猩红染液中染色8min,两缸或三缸无水乙醇脱水;

3、脱水封片:切片再放入干净的二甲苯透明5min,中性树胶封片。

4、显微镜镜检,图像采集分析。


案例:实验结果展示



 

 


结果判读


在普通光学显微镜下胶原纤维呈红色,其他组织成分被染成黄色。


送样运输要求


1.样本放置于>10倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。

2.石蜡切片常温运输,冰冻切片-20℃运输。


注意事项


无水乙醇脱水时应控制程度,片子不能残留多余的染液,也不能影响黄色的背景。


天狼猩红染色
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