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天狼猩红染色
技术介绍
天狼猩红(Picrosirius Red )染色可用于区分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型胶原，由于天狼猩红是一种强酸性阴离子染料，可与呈碱性的胶原反应，使胶原纤维在偏振光照射时，产生明显的双折光现象。不同的胶原纤维具有不同的旋光性，在偏振光显微镜下呈现相异的颜色，借以区分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型胶原，Ⅰ型纤维：紧密排列， 显示很强的双折光性，呈黄色或红色的纤维；Ⅱ型纤维：显示弱的双折光，呈多种色彩的疏松网状分布；Ⅲ型纤维：显示弱的双折光，呈绿色的细纤维；Ⅳ型纤维：显示弱的双折光的基膜，呈淡黄色。
天狼猩红染色可直接观察分析胶原纤维化程度，主要应用于各种组织病变时对胶原纤维异常或纤维增生的研究。
实验流程
脱蜡至水-天狼猩红染色-酒精脱水-封片。
实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自来水洗。
2、天狼猩红染色：切片入天狼猩红染液中染色8min，两缸或三缸无水乙醇脱水；
3、脱水封片：切片再放入干净的二甲苯透明5min，中性树胶封片。
4、显微镜镜检，图像采集分析。
案例：实验结果展示
结果判读
在普通光学显微镜下胶原纤维呈红色，其他组织成分被染成黄色。
送样运输要求
1.样本放置于＞10倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。
2.石蜡切片常温运输，冰冻切片-20℃运输。
注意事项
无水乙醇脱水时应控制程度，片子不能残留多余的染液，也不能影响黄色的背景。
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