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EVG染色

技术介绍


组织被含有三氯化铁和碘的苏木精染色再用过量的媒染剂三氯化铁中断组织与染料的结合,染料被分化液中的大量媒染剂吸引,使其从组织中清除。弹性纤维对铁苏木精具有较强的吸引力使染料能比其他组织保留更久而达到染色的效果。


实验流程


脱蜡至水-EVG染色-分化-VG染色-分化-酒精脱水-封片。


实验步骤


1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ 20min-二甲苯Ⅱ 20min-无水乙醇Ⅰ 5min-

无水乙醇Ⅱ 5min-75%酒精5min,自来水洗。

2、EVG染色:EVG染液A:EVG染液B:EVG染液C5:2:2混合成EVG染液(提前两天配置),切片入EVG染液染5min,自来水冲洗。

3、背景分化:EVG染液B稀释一倍后稍分化一下,自来水洗一下,如此反复操作,在显微镜下控制分化程度,至弹力纤维呈紫黑色,背景呈灰白色近无色。

4、复染VG:EVG染液E 9ml加入EVG染液D 1ml混合成VG染液(按比例配制用多少配多少),染1-3min(染色时间视组织中弹力纤维成分而定,染色时间过短胶原颜色浅,染色时间过长弹力纤维会褪色),快速水洗,无水乙醇三缸快速脱水。

5、透明封片:两缸干净的二甲苯透明各20s、5min(二甲苯专用不与其他二甲苯共用),中性树胶湿封。

6、显微镜镜检,图像采集分析。


案例:实验结果展示



 


结果判读


弹性纤维呈黑色,胶原纤维呈红色,背景呈黄色。


送样运输要求


1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。

2.石蜡切片常温运输,冰冻切片-20℃运输。


注意事项


分化时,至弹性纤维呈紫黑色的细丝状即可,不可过度分化,弹性纤维褪色,若分化不足,则VG复染后效果不佳。


EVG染色
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