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网状纤维染色

技术介绍


网状纤维内糖蛋白中己糖毗邻的羟基转变成醛基与二氨合银离子Ag(NH3)2+结合再经甲醛还原液作用,镜下显示网状纤维呈黑色网状纤维的形态和分布,断裂或崩解等的组织改变在病理诊断上有重要意义,特别是对协助肿瘤诊断和鉴别诊断有较大的帮助。


实验流程


脱蜡至水-网状纤维染色液染色-脱水封片-显微镜镜检


实验步骤


网状纤维孵育液:10%的硝酸银2ml,逐滴加入浓氨水,边加边摇匀,出现沉淀后继续滴加浓氨水,至沉淀恰好溶解(若沉淀在滴加浓氨水时的一瞬间澄清,说明氨水过量,需要重新配制),加入3%的NaOH 2ml,再次形成沉淀,逐滴加入浓氨水,至沉淀刚好溶解,加入超纯水定容至40ml。(用棕色瓶盛装,4℃保存1-2个月,用前复温)

1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。   

2、组织酸化:组画笔画圈圈住组织,滴加酸化液0.5%的高锰酸钾与0.5%的硫酸1:1混匀)于组织上氧化5min,切片入两缸超纯水浸洗共10s,稍甩干切片多余水分。

3、漂白:滴加2%的草酸于组织上漂白2min,切片入3缸超纯水浸洗,各5s,稍甩干切片多余水分。

4、媒染剂染色:滴加 网状纤维染液F于组织上媒染15min(避光),切片入3缸超纯水浸洗,各5s,稍甩干切片多余水分。

5、网状纤维孵育液染色:滴加网状纤维孵育液于组织上处理5min(避光),切片入3缸超纯水浸洗,各5s,稍甩干切片多余水分。

6、还原:滴加10%的中性甲醛液于组织上还原3min(避光,3min后肉眼观察组织未出现黄棕色时,可延长还原时间至5min,显色效果可能会有改善),切片入3缸超纯水浸洗,各5s,稍甩干切片多余水分。

7、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲Ⅰ5min- 二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。


案例:实验结果展示




 

结果判读


网状纤维呈黑色,背景棕黄色


送样运输要求


1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。

2.石蜡切片常温运输。


注意事项


1、网状纤维孵育液避光4℃条件下可保存7天左右(当短时间内染液中出现黑色颗粒,或者染液浑浊也可重新配制),使用前复温;NaOH、硫酸和草酸可以不避光常温保存,其余染色全部避光常温保存。

2、染色过程中,使用避光的染色盒进行染色。

3、在配制银氨液过程中,沉淀恰好溶解要严格把控。

 

网状纤维染色
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