维多利亚蓝是一种甲烷染料,可显示弹力纤维和乙型肝炎表面抗原,不易过染,染色后不易褪色 。 在临床上用于观察组织内弹力纤维是否增生或断裂崩解,从而协助诊断。
脱蜡至水-维多利亚蓝染色-核固红染色-脱水封片-显微镜镜检
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。
2、组织酸化:组画笔画圈圈住组织,滴加维多利亚蓝酸化液(维多利亚蓝A与维多利亚蓝B 1:1混匀,现配现用)于组织上氧化5min,切片入两缸水浸洗共10s,稍甩干切片多余水分。
3、组织漂白:维多利亚蓝C于组织上漂白2min,切片入3缸水浸洗,各5s,稍甩干切片多余水分。
4、组织着色:70%的乙醇浸洗,切片入维多利亚蓝染液D浸染24h(加盖),70%的乙醇浸洗2次,每次约10s,至玻片表面无染液附着为止,流水稍洗。
5、组织分化:镜检弹力纤维着色程度,着色深,切片入75%乙醇分化5s,自来水洗终止分化,镜检,反复分化水洗和镜检,至弹力纤维呈蓝色,背景淡蓝色或近乎无色;
6、复染:切片入维多利亚蓝染液E染色1-5min,流水冲洗。
7、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。
8、显微镜镜检,图像采集分析。
维多利亚蓝染色-大鼠血管
弹力纤维呈蓝色,细胞核呈红色
1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。
2.石蜡切片常温运输,冰冻切片-20℃运输。