固蓝染色(FAST BLUE)又称LFB染色,一般染脑、脊髓、外周神经。神经髓鞘呈亮蓝色,背景无色至浅蓝色,主要用来显示神经髓鞘的形态结构及病理变化。
脱蜡至水-固蓝染色-脱水封片-显微镜镜检
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ 20min-二甲苯Ⅱ 20min-无水乙醇Ⅰ 5min-无水乙醇Ⅱ 5min-75%酒精5min,自来水洗。
2、 髓鞘染色:髓鞘染液A置于60℃ 烤箱预热30min,切片入髓鞘染液A加膜加盖浸染1h,取出切片快速自来水洗。
3、背景分化:切片浸入髓鞘染液B中稍分化2s(趁热),直接浸入髓鞘染液C分化15s,水洗终止分化,镜检,反复分化水洗和镜检,至髓鞘呈蓝色背景近无色即可;
4、复染伊红:切片入65度烤箱烤干(约30min至玻片干燥)拿出,冷却后进入95%乙醇后后复染伊红。
5、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。
6、显微镜镜检,图像采集分析。
LFB染色-髓鞘
神经髓鞘呈蓝色,背景淡红色。
1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。
2.石蜡切片常温运输,冰冻切片-20℃运输。
1、将切片染完后,不能长时间放在水中清洗,颜色会褪掉。
2、注意交替分化时程度的把握,分过过度,髓鞘的颜色会褪掉,分化不足,则界限不清楚;
3、若分化过度,可以将切片至于染液中重染。