Golgi-Cox浸染法是研究神经元和胶质细胞正常和非正常形态最有效的方法之一。使用Golgi技术,在药物处理过的动物脑中和因神经疾病死亡的病人脑中发现了神经树突和树突微小的形态改变。
组织固定-组织块整体染色-脱水-切片封片-显微镜镜检
实验步骤
1、取材固定:将老鼠杀死后,立刻取脑组织置于4%的多聚甲醛液中固定24h以上。
2、高尔基染色:用生理盐水将脑组织轻轻漂洗几遍,将需要的实验部位切成2-3mm厚的脑组织块,高尔基染液将脑组织块完全浸没,放置阴凉通风处避光处理14天,浸泡48h后,换一次新染液,之后每隔3天换一次新染液。
3、组织块脱水:将组织块取出,置于15%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水约1天,取出组织块,置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水2天。
4、显影:将组织块取出,蒸馏水洗1min,浓氨水处理45min,蒸馏水洗1min,定影液处理45min,蒸馏水洗1min。
5、脱水冰切封片:置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水2-3天,冰冻切片100um,甘油明胶封片,拍照保存结果。
6、显微镜镜检,图像采集分析。
样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。
1、高尔基染液有剧毒,需要穿戴实验服和一次性手套操作实验;
2、染色过程中的每一步都需要严格避光。
3、高尔基染液放置阴凉通风避光处常温保存即可;定影液18℃-20℃避光通风处保存。