淀粉样蛋白对刚果红有选择亲和力,因此容易着染。据认为刚果红是一种分子为长线状的偶氮染料,其上的氨基容易和淀粉样蛋白的羟基结合,平行地附着在淀粉样蛋白的纤维上而显色。
脱蜡至水-刚果红染色-苏木素染色-脱水封片-显微镜镜检
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。
2、刚果红染色:切片入刚果红A液浸染一夜,自来水洗2min。
3、背景分化:刚果红B液分化1s,至阳性斑块明显,背景基本无色,自来水洗。
4、染核:切片入刚果红C液染1min,自来水洗,分化液分化,自来水洗,返蓝液返蓝,流水冲洗。
5、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。
6、显微镜镜检,图像采集分析。
淀粉样变斑块呈淡粉色或橘红色云朵状或片块状,细胞核呈浅蓝色。
1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。
2.石蜡切片常温运输,冰冻切片-20℃运输。
1、区分甲状腺胶质、弹力纤维和胶原纤维,可能都会染成红色;
2、分化时要掌握恰当,分化不足,胶原纤维也呈红色,分化过度,淀粉样变蛋白也可脱色。
3、若白光下未见阳性或者阳性很弱,则可在荧光下观察红光。