VonKossa矿化结节染色法原理是将矿化基质中的磷酸盐(钙)、碳酸盐(钙)转变为磷酸银、碳酸银,然后用日光、紫外线或强还原剂使其还原为黑色的金属银。可用以观察组织中钙的分部和钙含量多少的检测。
脱蜡至水-vonkossa染色-脱水封片-显微镜镜检
1、切片脱塑至水:依次将切片乙二醇乙醚乙酸酯Ⅰ 6 h,37℃,乙二醇乙醚乙酸酯Ⅱ过夜,37℃,乙二醇乙醚乙酸酯Ⅲ室温10-15 min,乙二醇乙醚乙酸酯Ⅳ室温10-15 min,100%Ⅰ乙醇10 min,100%Ⅱ乙醇10 min,95%乙醇10 min,90%乙醇10 min,80%乙醇10 min,自来水洗,切片用超纯水浸洗5次;
2、用组化笔画圈圈住组织,切片放置于透明湿盒中,立即滴加Von Kossa染液于组织上,加盖,用紫外灯连续照射5 min-20 min,蒸馏水洗多次。
3、苏木素染色:切片入苏木素染液染3-5 min,自来水洗,分化液分化,自来水洗,返蓝液返蓝,流水冲洗。
4、伊红染色:85%、95%的酒精梯度脱水各5 min,入伊红染液5 min;
5、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I 5 min,无水乙醇II 5 min,无水乙醇Ⅲ 5 min,二甲苯Ⅰ 5 min,二甲苯Ⅱ 5 min透明,中性树胶封片。
6、显微镜镜检,图像采集分析。
钙盐沉积区域呈黑色或棕黑色,细胞核呈蓝色,背景呈红色。
1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。
2.石蜡切片常温运输,冰冻切片-20℃运输。
1. Von Kossa染液滴染前,玻片必须用超纯水浸洗5次或以上;
2. 如果没有紫外灯,也可以用强太阳光照射。