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Von Kossa染色
技术介绍
VonKossa矿化结节染色法原理是将矿化基质中的磷酸盐(钙)、碳酸盐(钙)转变为磷酸银、碳酸银，然后用日光、紫外线或强还原剂使其还原为黑色的金属银。可用以观察组织中钙的分部和钙含量多少的检测。
实验流程
脱蜡至水-vonkossa染色-脱水封片-显微镜镜检
实验步骤
1、切片脱塑至水：依次将切片乙二醇乙醚乙酸酯Ⅰ 6 h，37℃，乙二醇乙醚乙酸酯Ⅱ过夜，37℃，乙二醇乙醚乙酸酯Ⅲ室温10-15 min，乙二醇乙醚乙酸酯Ⅳ室温10-15 min，100%Ⅰ乙醇10 min，100%Ⅱ乙醇10 min，95%乙醇10 min，90%乙醇10 min，80%乙醇10 min，自来水洗，切片用超纯水浸洗5次；
2、用组化笔画圈圈住组织，切片放置于透明湿盒中，立即滴加Von Kossa染液于组织上，加盖，用紫外灯连续照射5 min-20 min，蒸馏水洗多次。
3、苏木素染色：切片入苏木素染液染3-5 min，自来水洗，分化液分化，自来水洗，返蓝液返蓝，流水冲洗。
4、伊红染色：85%、95%的酒精梯度脱水各5 min，入伊红染液5 min；
5、脱水封片：切片依次放入无水乙醇I 5 min，无水乙醇II 5 min，无水乙醇Ⅲ 5 min，二甲苯Ⅰ 5 min，二甲苯Ⅱ 5 min透明，中性树胶封片。
6、显微镜镜检，图像采集分析。
案例：实验结果展示
结果判读
钙盐沉积区域呈黑色或棕黑色，细胞核呈蓝色，背景呈红色。
送样运输要求
1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。
2.石蜡切片常温运输，冰冻切片-20℃运输。
注意事项
1. Von Kossa染液滴染前，玻片必须用超纯水浸洗5次或以上；
2. 如果没有紫外灯，也可以用强太阳光照射。
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