EdU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见,能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中,基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性,广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒繁殖等方面的研究,尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及各种药物的细胞增殖及活力筛选实验。
与BrdU方法相比,EdU检测方法无需DNA变性,无需抗原修复,无需抗原抗体反应,更简单、更灵敏、更快速、更准确,是细胞增殖检测的***选择。
(1)细胞培养
(2)药物处理(可选)
(3)Edu标记
(4)细胞固定化
(5)染色
(6)图像获取及分析
EdU细胞增殖检测方法不需要剧烈的DNA变性操作,只需温和的细胞固定化和透化处理,能够较好地保护细胞形态、DNA整体结构及细胞内抗原识别位点,更适合结合其他染料或蛋白标记(如P65抗体)等进行多重标记,从而在细胞水平获取更多的直观多维特征信息,更适合深入开展细胞功能方面的研究。
结合P65抗体和EdU,分析药物对细胞增殖及NF-KB信号通路的影响
1.组织样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样;
2.石蜡切片常温保存运输;
3.冰冻切片-20℃保存运输;
4.细胞爬片固定液浸泡,4℃保存运输。