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抗酸染色

抗酸染色

技术介绍

抗酸杆菌菌体胞壁内含有类脂质，并由糖脂形成一个蜡质的外壳，它与苯酚碱性品红结合形成复合物，这种复合物与菌体结合后能抵抗酸类的脱色，因而抗酸杆菌呈红色。苯酚作为媒染剂，提高染料的染色性能，使碱性品红与抗酸菌牢固结合，也有助于碱性品红的溶解。本法常用以检查结核杆菌和麻风杆菌。

实验流程

脱蜡至水-抗酸染色-脱水封片-显微镜镜检

实验步骤

抗酸工作液的配制：抗酸染液A 10ml+抗酸染液B 90ml，混合均匀。

抗酸分化液的配制：取10ml浓盐酸用无水乙醇定容至1000ml

1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，水洗。

2、抗酸染色：切片入抗酸工作液中染色30min，流水冲洗；

3、背景分化：抗酸分化液快速分化2s，水洗终止分化，可反复操作，至镜检时抗酸菌为紫红色，背景基本无色即可；

4、硫酸分化：若切片背景较深，盐酸分化不掉时，切片入抗酸染液C快速分化1s，快速自来水洗（反复冲洗直至切片上无硫酸残留），重复操作至阳性菌呈紫红色，背景无色。

5、抗酸染液D染色：切片入抗酸染液D染30s，自来水洗，分化液分化2s，自来水洗，返蓝液返蓝3-5s，流水冲洗。

6、脱水封片：切片依次放入无水乙醇I 5min-无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min-二甲苯 Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明，中性树胶封片。

7、显微镜镜检，图像采集分析。

案例：实验结果展示

结果判读

抗酸菌(包括麻风杆菌和结核杆菌)呈紫红色，细胞核呈浅蓝色。

送样运输要求

1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。

2.石蜡切片常温运输，冰冻切片-20℃运输。

注意事项

1、两次分化都应注意分化程度，分化过度，将抗酸菌的紫红色分掉，分化不足，背景红色。

2、苏木素复染过程中要浅染，不能影响抗酸菌的观察。

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