抗酸杆菌菌体胞壁内含有类脂质,并由糖脂形成一个蜡质的外壳,它与苯酚碱性品红结合形成复合物,这种复合物与菌体结合后能抵抗酸类的脱色,因而抗酸杆菌呈红色。苯酚作为媒染剂,提高染料的染色性能,使碱性品红与抗酸菌牢固结合,也有助于碱性品红的溶解。本法常用以检查结核杆菌和麻风杆菌。
脱蜡至水-抗酸染色-脱水封片-显微镜镜检
抗酸工作液的配制:抗酸染液A 10ml+抗酸染液B 90ml,混合均匀。
抗酸分化液的配制:取10ml浓盐酸用无水乙醇定容至1000ml
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,水洗。
2、抗酸染色:切片入抗酸工作液中染色30min,流水冲洗;
3、背景分化:抗酸分化液快速分化2s,水洗终止分化,可反复操作,至镜检时抗酸菌为紫红色,背景基本无色即可;
4、硫酸分化:若切片背景较深,盐酸分化不掉时,切片入抗酸染液C快速分化1s,快速自来水洗(反复冲洗直至切片上无硫酸残留),重复操作至阳性菌呈紫红色,背景无色。
5、抗酸染液D染色:切片入抗酸染液D染30s,自来水洗,分化液分化2s,自来水洗,返蓝液返蓝3-5s,流水冲洗。
6、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I 5min-无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min-二甲苯 Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。
7、显微镜镜检,图像采集分析。
抗酸菌(包括麻风杆菌和结核杆菌)呈紫红色,细胞核呈浅蓝色。
1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。
2.石蜡切片常温运输,冰冻切片-20℃运输。
1、两次分化都应注意分化程度,分化过度,将抗酸菌的紫红色分掉,分化不足,背景红色。
2、苏木素复染过程中要浅染,不能影响抗酸菌的观察。