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革兰氏染色

技术介绍


革兰氏染色法可用来观察细菌的形态并鉴别细菌;在选择药物方面有一定的参考价值;革兰氏阳性菌能产生外毒素,革兰氏阴性菌能产生内毒素,两者的致病作用不同,与致病性也有关。革兰氏阳性菌呈蓝色或蓝紫色,革兰氏阴性菌呈红色。


实验流程


脱蜡至水—革兰氏染色—脱水封片-显微镜镜检


实验步骤


1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。

2、革兰氏染色:切片滴加革兰氏染液A滴染10s-30s,水洗,甩干;滴加革兰氏染液B1min,水洗,甩干;巴氏吸管吸取革兰氏染液C从载玻片磨砂面一端冲洗组织进行分化,至切片流下的革兰氏染液C呈无色即可,水洗,甩干;将切片浸革兰氏染液D溶液1s水洗,镜检,烤箱烤干。

3、脱水:将烤干的切片快速入三缸无水乙醇快速脱水,依次1s、3s、5s。

4、透明封片:切片放入干净的二甲苯5min透明,中性树胶封片。

5、显微镜镜检,图像采集分析。


案例:结果展示


革兰氏染色-小鼠肠道


 


结果判读


革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色。


送样运输要求


1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。

2.石蜡切片常温运输,细菌涂片常温运输。


注意事项


1、染色过程中的革兰氏染液C分化是关键步骤,需注意分化程度。

2、尽量不要重复染色,分化液在脱去片子颜色的同时也改变了细胞壁的通透性,影响了***结果的准确性。

3、冬季气温较低时,染色时间可适当延长。

 


革兰氏染色
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