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油红O染色

技术介绍


油红O对脂滴的染色机制一般认为是物理学上的溶液作用或吸附作用,借溶液作用使脂质染色,即油红O先溶于60%异丙醇中,然后切片浸入油红O染液中时,油红O在组织脂质的溶解度较60%异丙醇中的溶解度高,所以在染色时油红O从60%异丙醇中转移入脂质中使脂滴显示红色。


实验流程


冰冻切片晾干-油红染色-分化-苏木素染色-分化-返蓝-甘油明胶封片-显微镜镜检。


实验步骤


1、新鲜冰冻切片固定:将冰冻切片复温干燥,固定液中固定15min,自来水洗,晾干。

2、油红染色:切片入油红染液浸染8-10min (加盖避光)。

3、背景分化:取出切片,停留3s后依次浸入两缸60%异丙醇分化,各3s、5s。切片依次浸入2缸纯水中浸洗,各10s。

4、苏木素染色:取出切片,停留3s后浸入苏木素复染3-5min,3缸纯水浸洗,各5s、10s、30s。分化液(以60%酒精为溶剂)分化2-8s,2缸蒸馏水洗各10s,返蓝液返蓝1s,将切片轻轻浸入2缸自来水中浸洗,各5s、10s,镜检染色效果。

5、封片:甘油明胶封片剂封片。

6、显微镜镜检,图像采集分析。


案例:实验结果展示


 


实验结果判读


脂滴橙红色至鲜红色,细胞核浅蓝色


送样运输要求


1、样本放置于>10倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰;

2、新鲜组织干冰运输。

3、冰冻切片-20℃运输。


注意事项


1、如果是新鲜组织冰冻切片,需要先固定再染色;如果组织是固定以后冰冻切片,可以将切片晾干以后,直接染色。

2、整个操作过程中注意动作轻缓,不宜动作太大,以免脂肪丢失或者移位。

3、染色结果不能长期保存,封片后应尽快观察及拍照。

4、甘油明胶常温下为凝固状,一般60℃烤箱中保存。封片后如有气泡不能按压玻片也不宜强行扯下盖玻片,玻片可入温水中,让盖玻片自行脱落,然后重新封片,以防脂肪移位。

油红O染色
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