在酸性条件下,切片内的高铁盐与亚铁氰化钾作用生成亚铁氰化铁。普鲁士蓝染色可用来观察组织细胞中有无铁元素存在,以及铁元素存在的位置及含量。
脱蜡至水-普鲁士蓝染色-核固红染色-脱水封片-显微镜镜检
1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗,蒸馏水洗3遍。
2、普鲁士蓝染色:将普鲁士蓝染液A和普鲁士蓝染液B等比例混合成普鲁士蓝染液,切片入染液中染色1h,蒸馏水洗2遍。
3、染核:普鲁士蓝染液c染色3min,流水冲洗。
4、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。
5、显微镜镜检,图像采集分析。
铁元素、含铁血黄素呈蓝色,细胞核呈红色
1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。
2.石蜡切片常温运输,冰冻切片-20℃运输。
1、普鲁士蓝染液要现配现用。
2、切片染色前用蒸馏水洗干净,防止自来水中的铁离子在染色中反应,造成假阳性。