PI是一种溴化乙啶的类似物,能够与DNA强力结合,它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。可根据此原理,采用流式细胞仪对活死细胞进行鉴定及分析。
实验流程
收集细胞-PBS洗涤细胞-细胞计数-PI染色-上机检测
(1)收集细胞,PBS洗涤一次,2000rpm离心5min,用PBS重悬细胞,调整细胞密度约为106个/ml。
(2)取500μl细胞悬液,加入5μL PI染液。
(3)4°C避光放置30 min。
(4)流式细胞仪检测。
流式检测用氩离子激发荧光,激发波长为488nm,发射光波长大于630nm。
结果说明:被直线隔开的两个象限,上方为死细胞群及比例,下方为活细胞群及比例。
1. 全血样品:冷藏保存,需24h内送达;
2. 单细胞悬液:细胞数不应少于10000个,冷藏保存,需24h内送达,细胞凋亡坏死检测需2h内进行送检;
3. 新鲜实体瘤组织:冷藏保存,需24h内送达;