用于生物染色剂,如原生质的染色,染色目的多为观察凋亡细胞和血细胞,骨髓细胞以及受虐原虫或幽门螺旋杆菌感染的胃肠肺肝脾等组织。实验中多用于区分白细胞,并计数分析。
涂片-瑞氏姬姆萨染色-脱水封片-显微镜镜检
1、涂片制备:取细胞悬液,离心,弃上清液,加适量PBS缓冲液,混匀后取适量滴于载玻片前端,另取一块边缘光滑的载玻片做推片,将其一端置于液滴前方,向后移动至接触液滴使液滴均匀分散在推片与载片的接触处。然后呈30-40°角均匀用力向另一端平稳地推出。涂片放置自然晾干。
2、瑞士吉姆萨染色:
2.1血涂片染色:
①取一张血涂片,组化笔沿着载玻片的边缘尽量画一个***的长方形;若是其它细胞涂片,则不需要画圈。
②滴加适量瑞氏染液(完全覆盖细胞即可)染色1min,用盛装纯水的洗瓶冲洗组织上的染液,至玻片流水呈无色即可;
③胶头吸管滴加10滴吉姆萨染色液染色30s(洗耳球轻轻吹打至染液完全覆盖细胞)
用胶头吸管直接滴加20滴瑞氏吉姆萨C溶液于吉姆萨染色液上染色2min(洗耳球轻轻吹打混匀)。用盛装纯水的洗瓶冲洗组织上的染液,至玻片上流水呈无色即可;
④稍微甩下载玻片上多余的水份,显微镜快速观察:白细胞胞核分叶清晰,部分白细胞胞浆着淡红色,红细胞呈红色圆饼状,无核,数量较多。立即将染好的涂片置于65℃烤箱烘烤4h以上 。
2.2组织石蜡切片染色:
①石蜡切片脱蜡至水,自来水洗5min;
②取一张切片,组画笔沿着载玻片边缘画大圈圈住组织,胶头吸管滴加10滴瑞氏染液染色2min,直接滴加0.5ml吉姆萨:瑞氏吉姆萨D溶液=1:19混匀的混合液于瑞氏染液上染色30s(洗耳球轻轻吹打混匀);
③用盛装纯水的洗瓶冲洗组织上的染液,至玻片上流水呈无色即可;稍微甩下
载玻片上多余的水份,显微镜快速观察:肥大细胞呈紫红色,细胞核清晰呈蓝色,部分白细胞胞浆着淡红色,红细胞呈红色圆饼状,无核。立即将染好的涂片置于65℃烤箱烘烤4h以上
3、透明封片:干净的二甲苯5min,中性树胶封片。
4、显微镜镜检,图像采集分析。
瑞氏姬姆萨染色
涂片:红细胞呈橘红色圆盘状、无细胞核;白细胞胞核呈紫红色,染色质清楚,粗细松紧可辨;血小板为不规则细胞质小块、周边均匀呈浅蓝色,中央为细小的紫红色颗粒;中性粒细胞胞核呈紫蓝色,颗粒呈浅红色,形态多样;嗜酸粒细胞胞核呈紫蓝色,颗粒呈橘红色;嗜碱粒细胞胞核呈紫蓝色;淋巴细胞胞核呈蓝灰色,胞质呈淡蓝色;单核细胞胞核呈紫蓝色,胞质呈灰蓝色。
石蜡切片:红细胞呈橘红色圆盘状、无细胞核,血管周边纤维淡红色,细胞核蓝色,可见清晰核仁,肥大细胞紫红色。
1、制作良好的涂片要求厚薄适宜,分布均匀,边沿整齐。
2、制作的涂片需要充分干燥以防脱片。
3、染色时间可根据染液浓度,室温高低,细胞多少来进行调节。