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Goldner三色法染色

技术介绍


Goldner三色法染色主要是对骨组织的矿化骨与非矿化骨(类骨质)进行区分,其染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。此法主要用来观察骨缺损后修复过程中骨痂形成的过程。Goldner三色法与骨组织masson染色相比,前者主要区分矿化骨和非矿化骨,后者主要通过骨胶原的老化程度来判断骨组织的成熟度。


实验流程


脱蜡至水-三色法染液染色-脱水封片-显微镜镜检


实验步骤


1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。

2、细胞核染色:Goldner染液A与Goldner染液B液等比混合,切片入混合液染色20min,自来水洗,1%盐酸酒精溶液分化2s,自来水冲洗,蒸馏水洗。

3、Goldner染液C:片入***缸Goldner染液C浸染5-10 min,0.2%冰醋酸快速漂洗每缸3s。

4、Goldner染液D染色:切片入Goldner染液D浸染3min,显微镜下控制,以胶原处Goldner染液C褪色为准。

5、Goldner染液C染色:切片第二缸Goldner染液C染3-5min,0.2%冰醋酸快速漂洗每缸3s。

6、Goldner染液E染色:切片入Goldner染液E染3-5min,0.2%的冰醋酸三缸分化每缸2s,无水乙醇三缸脱水各2s、3s、5s。

7、透明封片:切片放入第三缸无水乙醇5min,二甲苯透明5min,中性树胶封片。

8、显微镜镜检,图像采集分析。


案例:实验结果展示



结果判读


矿化骨呈绿色,非矿化骨呈橙红色,红细胞呈红色,细胞核呈紫黑色或灰黑色。


送样运输要求


1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。

2.石蜡切片常温运输。


注意事项


1、根据切片的数量对铁苏木素染液定期进行更换,也可以现配现用;

2、Goldner染液D与Goldner染液C的染色程度要控制好,胶原部分不能是太红,会影响Goldner染液D的着色;

3、冰醋酸分化Goldner染液E的过程中,要分化适当,不能过深或者过浅。

 


Goldner三色法染色
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