细胞系作为正常或肿瘤组织的模式细胞被广泛应用于科学研究和药物开发,然而很大一部分的细胞系被错误标记或被其它个体、组织、种系来源的细胞所替代 。细胞系错误鉴定问题已有50年历史,基于国际细胞库的分析数据显示:1984年细胞错误鉴定率为35%,1999年为18%,直到最近几年,应用于生物医学领域的细胞系需要鉴定的问题仍然很严峻,造成实验数据的错误、时间及经费的损失。
STR(短串联重复序列)基因分型已被ICLAC、ATCC等权威机构作为金标准应用于细胞鉴定 。STR基因位点广泛存在于人类基因组中,可作为高度多态性标记,被称为细胞的DNA指纹。STR 基因座位上的等位基因可通过扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分,在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测来识别。随后通过一定的计算方法,即可根据所得的STR分型结果与细胞STR数据库比对从而推算出样品所属的细胞系或可能的交叉污染的细胞系名称。
津科生物为了进一步提高鉴定的分辨率,除了包含国际通用的ATCC检测的8个STR和1个性别决定位点Amelogenin外,另新增了11个高度多态性位点 ,共检测20个STR位点。
1. 基因组DNA: OD 260/280 在1.8~2.0之间, 浓度≥50ng/μl,体积≥20μl;
2. 组织块:介于绿豆粒~黄豆粒大小之间即可;
3. 新鲜细胞:(1)细胞数≥106;(2)贴壁细胞经胰蛋白酶消化后,离心收集细胞沉淀;(3)悬浮细胞直接离心收集细胞沉淀;(4)PBS清洗细胞沉淀,尽可能去除培养基与胰酶;
4. 冻存细胞:细胞数≥106,冻存细胞从液氮罐中,37℃水浴复苏,融化后离心收集细胞沉淀,尽可能去除冻存液,否则会影响DNA抽提质量;
5. 样本寄送:应在送样包裹中放置冰袋或干冰,建议顺丰快递;
为了保证DNA抽提质量,确保细胞在消化或冻存前,细胞状态良好,处于生长对数期;