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Cas9敲除稳定株构建
技术介绍
基因敲除原理：gRNA识别并结合在目标基因区域引导Cas9蛋白对结合位点进行切割，引起DNA双链断裂（DSB），触发细胞自身的非同源末端修复机制（NHEJ），NHEJ修复的过程中往往会产生DNA的插入或删除（Indel），造成移码突变，致使基因功能丧失，从而实现基因敲除。
当使用一条sgRNA在蛋白编码基因的外显子内产生DSB时，若NHEJ修复导致了缺口处产生了非3倍数的indels，则会造成蛋白翻译时的读码框移码（Framshift），不再产生完整的蛋白，即“移码敲除”。当使用两条sgRNA同时作用造成两个DSB时，NHEJ修复不但可造成染色体DNA片段的缺失，同时也可能造成读码框移码。这种基因组的双重修饰更强有力地破坏了编码蛋白的表达，即“片段敲除”。
实验流程
细胞分型——细胞预实验——gRNA设计——CRISPR/Cas9载体构建——gRNA靶点活性检测——基因敲除细胞系构建——基因型鉴定
案例：实验结果展示
（双gRNA慢病毒表达载体）
客户提供
1. 如客户不能提供载体的，需提供载体构建所需的相关信息，如载体类型等；
2. 构建稳定细胞株所需细胞系的选择；
3. 与构建稳定细胞株相关的其他信息。
交付内容
1. 本公司构建载体的，提供载体及带有载体的菌液各一份及相关的序列信息；
2. 构建成功的稳定细胞株，转染后需要检测的，参考相关实验服务；
3. 构建稳定细胞株实验所需试剂耗材、仪器设备、实验方法各一份；
4. 其他与构建稳定细胞株相关的信息。
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