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条件性基因敲除小鼠
技术介绍
条件性基因敲除是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出floxed小鼠， 该floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，该目的基因表达完全正常，而当该floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可以 在特定的组织或细胞中敲除该基因，而该基因在其它组织或细胞表达正常。
模型应用
1、用于具有胚胎致死性目的基因的研究；
2、用于研究基因在特定的组织或细胞中的生理病理功能；
3、与控制Cre或Flp表达的其它诱导系统相结合，还可以对某一基因的表达同时实现在时间和空间两方面的调控。
建系原则与流程
1、嵌合体小鼠鉴定：通过毛色判断嵌合体（黑白相间） ，黑色占的比例越大，嵌合率越高。
2、去除抗性基因 Neo：嵌合体小鼠和全身表达Flp deleter小鼠杂交，PCR鉴定，获得去掉打靶载体中的 Neo 基因的F1 代（杂合子）；
3、挑选一对F1 代小鼠进行自交，通过 PCR 鉴定筛选得到去除Frt两个位点片段纯合子的 F2代小鼠(命名：geneflox/ flox)。
备注：geneflox/ flox 两条染色体上都带有 loxp–gene-loxp 的模型。
**PCR 鉴定引物设计原则：根据Frt 前后及3’arm序列设计鉴定引物鉴定Neo是否去除；根据LoxP前后设计引物鉴定LoxP。
4、组织特异性敲除模型: Geneflox/ flox 小鼠与组织特异性Cre小鼠杂交， PCR 鉴定，得到敲除 gene 的杂合子F3 代小鼠；
5、挑选一对F3 代小鼠进行自交， 通过 PCR 鉴定筛选得到去除 gene 纯合子的 F4 代 cKO 小鼠。
**PCR鉴定引物设计原则：根据cKO region前5’arm及3’arm基因序列设计鉴定引物鉴定是否敲除。