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胼胝质染色—苯胺蓝法
技术介绍
用于观察植物中胼胝质。
实验流程
脱蜡至水—胼胝质染色—苯胺蓝法染色—脱水封片—显微镜镜检
实验步骤
针对植物切片
1、切片制备：脱色后的叶片取材包埋切片后脱蜡至水，纯水洗涤三次。
2、切片染色：切片用洗涤液浸洗3次，甩干洗涤液，切入0.01%苯胺蓝染色液中常温避光浸染2 h。
3、封片：切片用洗涤液浸洗3次，吸干水分。滴加抗荧光淬灭封片液封片，盖盖玻片。
4、拍照：观察拍照，用荧光显微镜（DAPI滤光片）观察胼胝质沉积，荧光易淬灭，应尽快拍照，注意避光，切片可短暂保存于4℃。
针对叶片
1、脱色：新鲜的植物组织（幼嫩的叶片）用脱色液脱色处理。
2、染色：组织经洗涤液洗涤3-5次，滤纸吸干多余液，在0.01%苯胺蓝染色液中常温避光漂染2 h。
3、铺片及封片：组织经洗涤液漂洗3-5次，滤纸吸干多余液体并平铺于载波片上，滴加抗荧光封片剂，盖盖玻片并轻轻将组织压平不可有气泡。
4、拍照：观察拍照，用荧光显微镜（DAPI滤光片）观察胼胝质沉积，荧光易淬灭，应尽快拍照，注意避光，切片可短暂保存于4℃。
案例：实验结果展示
结果判读
胼胝质呈现亮蓝荧光广泛分布在筛管周围。
送样运输要求
1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。
2.石蜡切片常温运输，冰冻切片-20℃运输。
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