蛋白质组学服务

蛋白质组学服务

蛋白质组学（Proteomics）是指利用高分辨的蛋白质分离技术和高效的蛋白质鉴定技术在蛋白质水平上整体性、动态和定量地研究生命现象及规律的科学，是系统生物学的有机组成部分。津科生物可为客服提供业内***的蛋白质组学服务，包括蛋白质组定性、iTRAQ/TMT/Label-free蛋白质组定量、外泌体蛋白质组定量、蛋白质组修饰分析等。

蛋白质定性分析

质谱技术具有强大的蛋白质定性能力，无论是细胞、血清、上清等复杂蛋白质组组，还是IP/Co-IP/pull-down等蛋白质产物，只要被鉴定物种有基因组序列信息，质谱技术即可获得样品中蛋白质及蛋白修饰的定性信息。

样本要求：

1.  SDS-PAGE条带：考染、银染条带清晰可见；

2.  可选择特定分子量区域的条带进行切割；

3.  如鉴定整条泳道蛋白质，则需将泳道切胶为6-8份，独立酶解；

4.  蛋白质溶液：总量大于5μg，浓度大于0.1μg/μL，缓冲液不含NP40等去污剂。

蛋白质组定量分析

1.  iTRAQ/TMT 标记蛋白质组定量

     iTRAQ和TMT技术是目前运用广泛的两种定量蛋白质组学技术，每批次实验最多可同时比较8例或10例样本的蛋白质组，具有检测平行度高、定量准确等优势。

     iTRAQ技术是由美国AB SCIEX公司研发的一种多肽体外标记技术。iTRAQ试剂由三部分组成，可形成8种等量异位标签，单批实验可进行8例样本的蛋白质组定量分析。一级质谱中，iTRAQ结合的同一多肽具有相同的质荷比。二级质谱中，iTRAQ平衡基团丢失，报告基团产生不同的报告离子信号强度，显示样品间相同肽段的定量差异信息。

TMT技术是由美国Thermo Fisher公司研发的一种多肽体外标记技术。在结构和检测原理上与iTRAQ试剂类似。最多可进行10例样本的蛋白定量分析。其中127/128/129/130四种标记试剂可以分别加载¹³C和¹⁵N两种异位标签，与126和131两种标记试剂合并，可形成一套10标试剂盒。当待检测的样本数量8-10例时，TMT标记定量方法尤为适用。

2.  Label-free 非标记蛋白质组定量

蛋白质非标记定量技术（Label-free），无需对样本进行标记，直接通过一级质谱对多肽和蛋白质进行半定量检测。由于不受标记试剂的限制，Label-free技术更适合用于对大批量样品进行平行比较的实验，同时Label-free技术路线简单，样品损坏少，适用于微量样品的检测。 

Label-free主要通过比较质谱检测肽段的一级谱图峰面积，分析不同样品中蛋白丰度的变化.主要定量原理：以一级质谱（MS1 )为基础，在保留时间轴上，同一个保留时间点可获取多张MS1谱图。在质荷比（m/z ）轴上，显示不同肽段被检测到的值.在蟑强度轴上，崦面积的大小间接反映肽段量的多少。最终利用Maxquant或者PD软件分析三种参数，计算出多肽的定量信息。

样本要求：

1.  细胞样本：细胞数量达到5*10⁶；

2.  组织样本：组织湿量达到50mg；

3.  植物样本：鲜嫩植物组织，湿量达到200mg；

4.  微生物样本：OD600达到1h，菌体湿量达到200mg。

外泌体蛋白质组定量

津科生物根据主流外泌体研究策略，开发了一套完整的外泌体蛋白质组学研究技术服务体系，以确保外泌体研究在同样技术标准下获得高质量研究数据。客户只需提供抽提好的外泌体或外泌体来源样本，其余所有实验项目均由津科生物完成。

样本要求：

1.  血清/血浆样本：大于2mL；

2.  细胞上清样本：大于150mL；

3.  尿液样本：大于100mL；

4.  外泌体蛋白：大于100μg。

蛋白质组修饰分析

磷酸化蛋白质组分析的目的在于鉴定样品中发生磷酸化的蛋白质以及相应的磷酸化位点。而磷酸化蛋白的丰度通常很低，因此富集磷酸化蛋白和肽段是磷酸化蛋白质组研究的基础。在酸性条件下，TiO₂表面带正电，可与磷酸化肽段产生静电作用而达到富集效果。TiO₂与iTRAQ/Label-free定量蛋白质组学技术的结合，可实现磷酸化蛋白质组的鉴定和定里比较。

样本要求：

1.  细胞样本：细胞数量达到106；

2.  组织样本：组织湿量达到100mg；

3.  微生物样本：OD600达到1h，菌体湿量达到200mg；

4.  蛋白提取物：蛋白总量大于500μg，浓度大于1μg/μL。