荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)是PCR反应体系中加入荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,与DNA产物特异性结合,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,最终通过相对定量或***定量的方法确定各个样本的本底表达量。可以用于检测mRNA、lncRNA、miRNA、circRNA的基因表达水平。
1、样本RNA提取
2、RNA质量质检(浓度测序,纯度检测)
3、样本cDNA合成
4、梯度稀释的标准品及待测样本的管家基因实时定量PCR;
5、制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板
6、待测样本的待测基因实时定量PCR
7、数据分析
1、电泳图
2、扩增曲线
3、溶解曲线
1)已知的基因序列或引物序列
2)引物:20个50μl PCR体系用量
3)提供样品
基因组DNA、cDNA或质粒模板:>5μg/样品;
动物组织:不少于200 mg;
动物细胞:细胞数不少于107 以上;
菌样:饱和浓度样品不少于1 ml,其它菌样不少于106 个菌;
土壤淤泥样:不少于100 g 样品;
血液样:全血不少于300 μl;
植物根茎叶等组织:不少于500 mg 。
服务项目 | 说明 |
RNA提取 | 提供电泳图片、浓度及纯度值。 |
RNA提取+反转录 | RNA提供电泳图片、浓度、纯度值。 |
DNA提取 | 样本可为血液、细菌、真菌、动植物和特殊样品(如石蜡样、水样、土壤等),提供电泳图片、浓度及纯度值。 |
PCR扩增 | 以DNA为模板进行扩增,用于目的基因的获取、序列分析或基因多态性分析 |
RT-PCR扩增 | 以cDNA为模板进行扩增,用于目的基因的获取或序列分析 |